5.18重慶市中山醫(yī)院劉老師在我司訂購(gòu)了人細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）elisa試劑盒、人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）ELISA試劑盒，有的客戶在訂購(gòu)ELISA試劑盒的時(shí)候都會(huì)問(wèn)到關(guān)系ELISA試劑盒的一些問(wèn)題，ELISA試劑盒主要的問(wèn)題有哪些呢？
在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，加底物后多長(zhǎng)時(shí)間終止反應(yīng)測(cè)定結(jié)果呢?讓我司錢經(jīng)理為您講解，一般可采取以下這兩種方法：
、任意確定一個(gè)時(shí)間，如20分鐘或30分鐘終止反應(yīng)，測(cè)定被檢標(biāo)本和陽(yáng)性參考標(biāo)本的O.D值。
第二、制備好一批酶結(jié)合物后預(yù)試時(shí)間，在反應(yīng)溫度固定時(shí)，當(dāng)陽(yáng)性參考血清O.D值達(dá)到1.0時(shí)終止反應(yīng)，記錄這個(gè)時(shí)間，如30分鐘，以后用本批酶結(jié)合物測(cè)定待檢樣品時(shí)都采用同一時(shí)間終止反應(yīng)，這個(gè)辦法不需要校正，比較方便。
國(guó)外在使用自動(dòng)測(cè)定儀時(shí)，加底物后隨時(shí)測(cè)定，每塊試驗(yàn)板上陽(yáng)性參考血清的O.D值，當(dāng)其達(dá)到1.0時(shí)，立即將全板上被試標(biāo)本終止反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定，這樣所得結(jié)果比較一致。我國(guó)也有自動(dòng)酶標(biāo)測(cè)定儀，但由于固相載體不夠均勻，也很難用板來(lái)直接測(cè)定。
在ELISA中所加酶結(jié)合物之濃度，加后孵育時(shí)間以及加底物后孵育時(shí)間。這三個(gè)因素也是互相有影響的。一般講，酶結(jié)合物濃度低，則要求孵育時(shí)間長(zhǎng)些，而酶結(jié)合物濃度高則要求孵育時(shí)間短些，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況，變更不同因素，以取得良好的結(jié)果。
由于ELISA中變異因素多，對(duì)于要診斷某一疾病時(shí)，必須進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室預(yù)試，摸索，或叫實(shí)驗(yàn)研究，在酶結(jié)合物已經(jīng)確定的情況下，一般要求預(yù)測(cè)以下5個(gè)條件：
1.抗原包被濃度;
2.被檢血清稀釋度，即測(cè)劑量反應(yīng)曲線;
3.抗體作用時(shí)間;
4.酶結(jié)合物作用時(shí)間;
5.底物作用時(shí)間。
一旦試驗(yàn)條件摸清，以后在正式測(cè)定時(shí)，必須固定條件，不要隨時(shí)改變，以使試驗(yàn)系統(tǒng)保持足夠的穩(wěn)定性。
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